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粒子上的包被量,直接關(guān)系到包被結(jié)果及成本。如果包被量太低,則有可能不利于大程度上捕獲抗原;如果包被量太高,則有可能不利于節(jié)省成本,甚至可能過于“擁擠”而使部分失去活性。一般而言,我們建議每100 mg的微球,包被5~30 mg的蛋白不等。大微球比表面積小,包被蛋白的量較少;小微球比表面積大,包被蛋白的量較多。每個(gè)項(xiàng)目不一樣、每個(gè)廠家的來源有差異,具體的包被量,仍需按照實(shí)驗(yàn)結(jié)果摸索。
在評(píng)估局部缺血時(shí),多種染料與微粒標(biāo)志物被用來標(biāo)記“風(fēng)險(xiǎn)區(qū)”。這些標(biāo)記物包括埃文斯藍(lán)、India Ink 和熒光素。然而,這些染料會(huì)很快遷移遍布整個(gè)組織,使得風(fēng)險(xiǎn)區(qū)很難被辨別出來。
而熒光微粒標(biāo)記物之所以能夠發(fā)揮作用,是因?yàn)樗鼈兛梢詴和S谥?,在熒光燈下很容易被識(shí)別。微粒上被重度染色,萍鄉(xiāng)標(biāo)準(zhǔn)微球,能夠產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光,熒光標(biāo)準(zhǔn)微球,可以很容易被識(shí)別。此微粒在白光下是不可見的,標(biāo)準(zhǔn)熒光微球,因而可用于檢查無危險(xiǎn)組織的梗死情況。由于是微粒內(nèi)部染色,不會(huì)滲濾或引起染色其他物質(zhì)。
蛋白質(zhì)可通過多種方式共價(jià)交聯(lián)到微球表面。微球表面含有環(huán)氧基、氯、醛基、羧基等基團(tuán),都可以和的Fc端的氨基反應(yīng),形成共價(jià)鍵。當(dāng)選擇共價(jià)交聯(lián)方式的時(shí)候,往往需要考慮交聯(lián)的效期、工藝復(fù)雜程度和后的帶電狀況。
種基團(tuán)可以直接與蛋白的氨基反應(yīng),凝膠微球標(biāo)準(zhǔn),形成共價(jià)鍵,使用起來較方便,但儲(chǔ)存穩(wěn)定性較之羧基微球稍差。而羧基微球則需經(jīng)過EDC/NHS活化之后,才與蛋白的氨基反應(yīng),形成共價(jià)鍵。由于羧基微球本身不具有直接和蛋白質(zhì)反應(yīng)的性能,因此具有較強(qiáng)的化學(xué)穩(wěn)定性。兩種方法各有優(yōu)缺,在選擇的時(shí)候,需根據(jù)本身的情況進(jìn)行選擇。
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