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ELISA試劑盒的測定原理
測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的診斷劑離不開好的原料,如抗原,酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原,而則為純化抗原動物后獲得的多和使用雜交瘤技術(shù)得到的,而抗原或的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或及其酶結(jié)合物等測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。
ELISA試劑盒的分類
檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準(zhǔn)確地做稀釋工作,保證實驗結(jié)果的重復(fù)性。
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
現(xiàn)白板,陽性對照不顯色
1 顯色液變質(zhì) 更換新的顯色液
2 洗滌液配制有誤 請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制
3 未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入 注意不要漏加
4 終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂?每次加液前均應(yīng)看清標(biāo)簽
5 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法錯誤/或標(biāo)準(zhǔn)品有問題 請按照說明書所示配置說明書,注意單位和稀釋倍數(shù)
6 不同試劑盒或不同批號的試劑混用 建議使用同批次試劑盒。不能混用不同試劑盒或不同批號的試劑。
ELISA試劑盒主要實驗原理
·包被:抗原或者能以物理性吸附于固相載體表面,原因是蛋白質(zhì)和聚乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反應(yīng)等活性;
·標(biāo)記:抗原或者可通過共價鍵與酶連接成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其活性和酶的催化特點;
·顯色:酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或者結(jié)合后,也被固定在固相載體上,加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng),根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計算抗原或者的相對含量。