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ELISA試劑盒的測定原理

測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的診斷劑離不開好的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原動物后獲得的多抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結(jié)合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。

ELISA試劑盒的試驗原理

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

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Elisa試劑盒有哪些需要注意的？

1. 跟著病況的進展或由其他因素影響，某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖，因此有必要對標本進行預處理。間接法測定中，標本恰當稀釋還可下降非特異性反響。

2. 加樣一般運用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標本時有必要每份標本運用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時則不需更換吸嘴。

3.在成批手藝檢測中，還應(yīng)留神操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反響和酶促反響時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不留神可能會導致過錯效果或定量不準。