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抑菌效力

黑曲霉菌懸液：操作時(shí)關(guān)閉空調(diào)系統(tǒng)及潔凈工作臺風(fēng)機(jī)。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，23～28℃培養(yǎng)5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至           ，用比濁法制成每1ml含孢子數(shù)108cfu的孢子懸液。3、v-p試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酸，丙酸縮合，脫羧成乙酰，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱v－p( )反應(yīng)。

抑菌效力-培養(yǎng)基

培養(yǎng)基的制備

1.胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基

 胰酪胨17.0克

氯化鈉5.0克

大豆木瓜蛋白酶消化物3.0克

磷酸氫二鉀2.5克

葡萄糖（一水合）2.5克

水1000mL

除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過，調(diào)節(jié) pH 值使滅菌后在 25℃的 pH 值為 7.3±0.2，加入葡萄糖，分裝，滅菌。

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置 20～25℃培養(yǎng)。

2. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基

胰酪胨15.0克

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0克

瓊脂15.0克

水1000ml

除瓊脂外，取上述成分，混合。微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 值使滅菌后在 25℃的 pH 值為 7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，搖勻，分裝，滅菌。

3.沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基照微生物限度檢查法（附錄ⅩⅢ C）制備。

微生物限度檢查

   （2）薄膜過濾法 薄膜過濾法所采用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm，直徑一般為50mm，若采用其他直徑的濾膜，沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。供試品及其溶劑應(yīng)不影響濾膜材質(zhì)對微生物的截留。3、真空冷凍干燥法指將保藏的junzhong細(xì)胞或孢子懸浮于保護(hù)劑中，經(jīng)預(yù)凍后在真空條件下使水分升華，再經(jīng)真空封存后保存的一種長期保存方法。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品，其濾膜和濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的da過濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml?？倹_洗量不得超過1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。

   取照上述“供試液的制備” “接種和稀釋” 和“抗jun活性的去除或滅活” 制備的供試液適量（一般取相當(dāng)于1g、1ml或10c㎡的供試品，若供試品中所含的菌數(shù)較多時(shí)，供試液可酌情減量），加至適量的稀釋液中，混勻，過濾。用適量的沖洗液沖洗濾膜。

   若測定需氧菌總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板上；若測定霉菌和酵母總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上。有時(shí)為了更有效地分離某些yanyangjun，可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)皿放在完全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。按表1規(guī)定條件培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。每株試驗(yàn)菌每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜。同法測定供試品對照組及菌液對照組菌數(shù)。

   3.MPN 法

   取規(guī)定量供試品，按方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備和供試品接種，所有試驗(yàn)管在30～35℃培養(yǎng)3～5天，如果需要確認(rèn)是否有微生物生長，按方法適用性試驗(yàn)確定的方法進(jìn)行?！竽cgan菌簡介——大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)通常被稱為大腸gan菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，在相當(dāng)長的一段時(shí)間內(nèi)，一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分，認(rèn)為是非致病菌。記錄每一稀釋級微生物生長的管數(shù)，從表3査每1g 或1ml供試品中需氧菌總數(shù)的可能數(shù)。

   結(jié)果判斷

   需氧菌總數(shù)是指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括真菌菌落數(shù)）；霉菌和酵母菌總數(shù)是指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的總菌落數(shù)（包括細(xì)菌菌落數(shù)）。1、傾注平板法首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌使霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)結(jié)果不符合微生物限度要求，可使用含kang生素（如氯霉su、慶大霉su）的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基（如玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)測定。使用選擇性培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。若采用MPN法，測定結(jié)果為需氧菌總數(shù)。