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酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞溶質(zhì)中的SOD呈綠色，并且由兩種亞單位構(gòu)成，一種含有銅，另一種含有鋅（Cu/Zn-SOD）。線粒體和細(xì)菌SOD為紅紫色并含有錳（Mn-SOD）。E.coli含有Mn-SOD和Fe-SOD。為了測定SOD的活性，研究人員嘗試了許多間接的或者直接的方法，其中，NBT的間接法為常用，因?yàn)樗芊奖恪５?，NBT法有幾個(gè)缺點(diǎn)，例如生成的染料水溶性差，而且會(huì)和氧化酶的還原型發(fā)生反應(yīng)。雖然cytochrome C法也常被用來做SOD檢測，但它和超氧化物反應(yīng)過于劇烈，不能測定低水平的SOD。