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在前PCR區(qū)建立PCR混合物:
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃,在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。
⑵如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物,以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì),可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
⑶作為一個(gè)規(guī)則,應(yīng)該保存一套陰性、弱陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照樣品來(lái)分析樣品配制和PCR前過(guò)程的效率和潔凈程度。而且,你也希望通過(guò)使用一個(gè)已知的弱陽(yáng)性樣品來(lái)驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。
⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做,以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染,陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。
⑸當(dāng)做陽(yáng)性對(duì)照時(shí),有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用很少數(shù)量的核酸。
⑹由于必須有對(duì)照反應(yīng),對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。
擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA擴(kuò)增。此外,已制備的DNA模板 (來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。
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對(duì)于全新的空調(diào)機(jī)組,在進(jìn)氣口處安裝一個(gè)鋁制過(guò)濾網(wǎng),應(yīng)至少每周清潔一次。在pcr實(shí)驗(yàn)室凈化中,如果絮狀物和灰塵漂浮,它們應(yīng)該每周清洗兩次。在拉出鋁網(wǎng)之前,需要關(guān)閉新鮮空氣裝置,清潔后的過(guò)濾器只有在干燥后才能安裝。在聚合酶鏈反應(yīng)純化過(guò)程中,檢查風(fēng)機(jī)冷凝水管道是否堵塞,氣封中是否有積水。風(fēng)扇表面冷卻器下方有一個(gè)集水盤(pán),用于接收冷凝水,冷凝水通過(guò)帶空氣密封的管道排放到地漏處。
如果在pcr純化過(guò)程中排水冷凝管被堵塞,水將在機(jī)柜中積聚,這將導(dǎo)致細(xì)菌繁殖并影響純化效果??諝饷芊獾墓δ苁欠乐古潘芡獾目諝馔ㄟ^(guò)排水管彎頭處積聚的水回流到類似于風(fēng)扇中的洗滌池的水封,這可用于防止臭氣溢出。因此,在pcr實(shí)驗(yàn)室的凈化過(guò)程中,當(dāng)冬季沒(méi)有冷凝水時(shí),應(yīng)注意檢查氣封中積聚的水是否干燥,如果干燥,應(yīng)及時(shí)加入清水,使其保持水封狀態(tài)。
山西PCR實(shí)驗(yàn)室_山西實(shí)驗(yàn)室家具,擁有多年設(shè)計(jì)和施工經(jīng)驗(yàn),無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室,凈化工程,負(fù)壓手術(shù)室,負(fù)壓隔離病房,一站服務(wù),全部搞定,實(shí)驗(yàn)室專業(yè)更專注!
PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域儀器設(shè)備配備通常如下:
1、標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室試劑準(zhǔn)備區(qū): 儀器設(shè)備主要應(yīng)有加樣器、冰箱、天平、低速離心機(jī)、混勻器、可移動(dòng)紫外燈等??墒褂贸瑑艄ぷ髋_(tái)作為試劑配制操作臺(tái)面。
2、標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本制備區(qū)儀器設(shè)備主要應(yīng)有生物安全柜(為B2, 可避免提取核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán),造成標(biāo)本間交叉“污染”,出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
此外還應(yīng)配備加樣器、臺(tái)式高速離心機(jī)(冷凍及常溫)、臺(tái)式低速離心機(jī)、恒溫設(shè)備(水浴和干浴儀)、冰箱、混勻器和可移動(dòng)紫外燈等。