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博日食品加工公司核酸提取純化詢問(wèn)報(bào)價(jià) 勱博公司

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發(fā)布時(shí)間:2020-08-08 12:21  






廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測(cè)、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測(cè)、非洲檢測(cè)、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測(cè)試劑盒。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、生豬屠宰場(chǎng)。而熒光定量PCR可以在反應(yīng)進(jìn)行過(guò)程中進(jìn)行累積擴(kuò)增產(chǎn)物的分析和檢測(cè),即“實(shí)時(shí)”。

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PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,從而進(jìn)入平臺(tái)期。在傳統(tǒng)的PCR中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來(lái)檢測(cè)PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物,因此用此終點(diǎn)法對(duì)PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的熒光信號(hào),隨著反應(yīng)時(shí)間的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)的變化可以繪制成一條曲線。在相對(duì)定量中,其前提是假設(shè)內(nèi)源控制物不受實(shí)驗(yàn)條件的影響的,合理地選擇合適的不受實(shí)驗(yàn)條件影響的內(nèi)源控制物也是實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠與否的關(guān)鍵。

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在PCR反應(yīng)早期,產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別,而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和終的平臺(tái)期,因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點(diǎn)上來(lái)檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量,并且由此來(lái)推斷模板i初的含量。為了便于對(duì)所檢測(cè)樣本進(jìn)行比較,在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期,首先需設(shè)定一定熒光信號(hào)的域值,一般這個(gè)域值(threshold)是以PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào)(baseline),熒光域值的缺省設(shè)置是3~15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。另外,熒光定量PCR的結(jié)果無(wú)需通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)評(píng)估,大大節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間,提高實(shí)驗(yàn)效率。


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FQ-PCR在醫(yī)學(xué)栓測(cè)中有價(jià)值的應(yīng)用領(lǐng)城就是對(duì)感i染性疾病的診斷,只要有限的核酸序列清楚,運(yùn)用FQ-PCR技術(shù),檢測(cè)任何病原體。目前,對(duì)一些培養(yǎng)周期長(zhǎng)或缺乏穩(wěn)定可靠的檢測(cè)手段的病原體,可以考慮用FQ-PCR檢測(cè),為臨床診斷提供依據(jù)FQ-PCR對(duì)病原體的檢測(cè)克服了免i疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期“問(wèn)題,可判斷疾病是否隱性或亞臨床狀態(tài)。FQ-PCR技術(shù)可以應(yīng)用于腫癟的研究及診斷。不同的核酸序列,哪怕僅有一個(gè)堿基的差異,也會(huì)體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。

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實(shí)時(shí)熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過(guò)程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數(shù))指數(shù)的方式進(jìn)行模板的擴(kuò)增。但在實(shí)際的PCR反應(yīng)過(guò)程中,隨著反應(yīng)的進(jìn)行由于體系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰減)使得靶序列并非按指數(shù)方式擴(kuò)增,而是按線性的方式增長(zhǎng)進(jìn)入平臺(tái)期。因此在起始模板量與終點(diǎn)的熒光信號(hào)強(qiáng)度間沒(méi)有可靠的相關(guān)性。如采用常規(guī)的終點(diǎn)檢測(cè)法(利用EB染色來(lái)判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經(jīng)PCR擴(kuò)增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點(diǎn)熒光信號(hào)強(qiáng)度。廣州勱博--博日病毒核酸提取系統(tǒng)在PCR擴(kuò)增中,溶液中的模板變性后低溫退火時(shí),引物與探針同時(shí)與模板結(jié)合。



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隨著定量PCR儀設(shè)計(jì)上的不斷改進(jìn),對(duì)溫度控制的精密性越來(lái)越高,出現(xiàn)了像Rotor-Gene這樣的管間溫度均一性達(dá)±0.01℃的定量PCR儀,而該公司新近推出的Rotor-Gene6000更可達(dá)到±0.02℃的溫度分辨率。溫度上的高分辨率使得運(yùn)用定量PCR儀進(jìn)行高分辨率熔解曲線(HRM)分析基因型成為可能。高分辨率熔解曲線根據(jù)序列長(zhǎng)度、GC含量和互補(bǔ)性分析樣品。不同的核酸序列,哪怕僅有一個(gè)堿基的差異,也會(huì)體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯i仿相,中間層以及無(wú)色水相上層。

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PCR是1985年開(kāi)始出現(xiàn)的一項(xiàng)基因檢測(cè)技術(shù),由于PCR技術(shù)具有簡(jiǎn)便易行、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),該技術(shù)被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究,成為分子生物學(xué)必不可少的研究工具。但在許多情況下,研究者們已不再滿足于得知某一特異DNA序列的存在與否,他們更著眼于對(duì)其進(jìn)行精i確的核酸定量。因而,借助PCR對(duì)基因快速、敏感、特異而準(zhǔn)確的定量成為目前分子生物學(xué)技術(shù)研究的熱點(diǎn)之一。實(shí)時(shí)熒光定量PCR( real-time quantitative PCR, RQ PCR)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,它以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)成為分子生物學(xué)研究中的重要工具。根據(jù)其使用范圍可以分為兩類,一種是大型核酸提取儀,另一種是小型核酸提取儀。


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