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分析試劑盒配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 溫育:操作同3。 洗滌:操作同5。 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
注意事項(xiàng)
1.為保證得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在使用此試劑盒之前請(qǐng)認(rèn)真閱讀該注意事項(xiàng);
2.試劑(尤其是小瓶裝的試劑)在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落;
3.Propidium iodide(PI)能通過(guò)皮膚吸收,睛有刺激作用;
4.此試劑盒僅供科研使用,不宜用于臨床診斷;
5.細(xì)胞的洗滌同常規(guī)方法。
就是具有自動(dòng)清洗程序的全自動(dòng)生化分析儀也有交叉污染,例如Beckman 全自動(dòng)生化分析儀CX4,它的試劑針(probe)、樣品吸樣針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗洗液沖洗,然后用高壓壓縮空氣吹干,有時(shí)由于洗液壓力和壓縮空氣壓力偏低,使試劑吸針、樣品針及反應(yīng)攪拌棒沖洗不干凈、吹不干,從而導(dǎo)致反應(yīng)池之間相互污染、試劑間交叉污染,是檢驗(yàn)結(jié)果偏離。另一個(gè)值得注意的問(wèn)題是許多生化儀器由于長(zhǎng)期頻繁的利用,使加樣針和試劑針的磨損加重或的“特氟龍”吸頭不及時(shí)更換,使吸樣針或試劑針密封層增大,產(chǎn)生泄露現(xiàn)象也是造成樣本間及實(shí)際間項(xiàng)目污染的一個(gè)重要原因。
Mg放在ALP等含有鎂離子項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Ca放在a-amy項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差,Mg試劑(calmagite法)中含有EGTA,會(huì)干擾Ca的測(cè)試結(jié)果。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個(gè)項(xiàng)目的PH值相差較大或反應(yīng)對(duì)PH要求嚴(yán)格的項(xiàng)目,也會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響, TBA放在TP,ALB,UA,后邊測(cè)定,會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏低等等。解決辦法:a、調(diào)整試驗(yàn)的前后順序來(lái)消除這種影響;b、在造成污染的項(xiàng)目和受污染的項(xiàng)目之間設(shè)置清洗并設(shè)定清洗的次數(shù)。