單分散層析介質(zhì)優(yōu)惠報價「納微科技」

小粒徑無孔單分散層析介質(zhì)用于病毒的分離純化

傳統(tǒng)的層析介質(zhì)填料都是多孔的微球，因為多孔微球材料的比表面積大，因而可以對一般生物分子分離提供較高的吸附載量。層析介質(zhì)的孔徑一般都小于2000?（通常都小于100納米）。而很多病毒顆粒的粒徑一般都大于20納米，有的甚至都超過100納米。由于體積排阻的原因，病毒顆粒無法擴散進入層析介質(zhì)的孔內(nèi)，因而在層析吸附病毒顆粒時只有介質(zhì)微球的外表面可以利用，孔內(nèi)表面積由于體積排阻的原因而無法吸附病毒顆粒。然而，病毒樣品中的雜質(zhì)分子一般都比病毒小，因而可以擴散進入層析介質(zhì)孔內(nèi)被吸附在里面。由于傳統(tǒng)層析介質(zhì)孔內(nèi)表面積遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于介質(zhì)微球外表面積，雜質(zhì)吸附往往由于孔內(nèi)表面積的存在而非常顯著，吸附洗脫時雜質(zhì)含量因而較高，病毒顆粒純化效果往往不理想。無孔層析介質(zhì)由于沒有大量只能容納雜質(zhì)進入而病毒顆粒無法擴散進入的內(nèi)孔，病毒顆粒在介質(zhì)外表面的層析吸附量雖然不會有明顯變化，但樣品中的雜質(zhì)被層析吸附的量會顯著減少。因此經(jīng)無孔層析填料層析洗脫后，病毒樣品的分離純度顯著提高。

分離純化抗l體的目的。野l生型Protein A蛋白是金黃色葡l萄球菌細(xì)胞壁錨釘?shù)鞍?。三維空間上，抗l體FC端CH2-CH3區(qū)域與Protein A蛋白B結(jié)構(gòu)域上兩條反相平行的α螺旋結(jié)構(gòu)相互結(jié)合。因此Protein A與抗l體分子特別是與IgG1、IgG2、IgG4有特異性結(jié)合，使得抗l體分子與發(fā)酵液中不具FC端結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)如宿主蛋白與核酸等有效分離，進而達(dá)到純化目的。Protein A 親和層析介質(zhì)是通過把ProteinA 配基偶聯(lián)到微球介質(zhì)上制備而成的。因為Protein A配基與目標(biāo)抗l體的作用的專一性，因此親和層析的分離純化工藝和方法與抗l體樣品雜質(zhì)含量和種類多少影響不大，使用Protein A 介質(zhì)一步純化目標(biāo)抗l體就可以達(dá)到95%以上純度，回收率達(dá)到90%以上。親和純化效率也基本不受雜質(zhì)多少影響，而其它分離模式如離子交換，疏水，分子篩等的分離工藝方法及效率大多取決于與目的蛋白同時存在的雜質(zhì)種類和含量。因此，只要樣品雜質(zhì)不同，即使是純化同樣的目標(biāo)生物分子，采用的分離工藝和方法就不同。以重組胰島素分離純化為例，不同廠家雖然生產(chǎn)的是同一目標(biāo)胰島素，但采用分離純化方法完全不一樣，主要原因就是每家生產(chǎn)的胰島素雜質(zhì)組成和含量不一樣，因此需要不同的純化工藝。而比胰島素分子量更大，結(jié)構(gòu)更復(fù)雜的抗l體基本可以采用標(biāo)準(zhǔn)化的三步曲，主要原因就是Protein A 親和介質(zhì)的出現(xiàn)大大簡化抗l體的分離純化工藝，但Protein A 價格昂貴讓抗l體生產(chǎn)廠家愛恨交加。

   之三：高度交聯(lián)聚丙l烯酸酯基球替代軟膠或低交聯(lián)的聚丙l烯酸酯基球    高機械強度介質(zhì)不僅可以耐受更高流速、更高壓力、更大粘度樣品，還可以裝更高的柱床，以增加抗l體批處理量、提高抗l體生產(chǎn)效率、減少設(shè)備投資、減少廠房占用面積。因此納微Protein A 介質(zhì)是選擇高度交聯(lián)的聚丙l烯酸酯基球，與市場上以瓊脂糖或低交聯(lián)度聚丙l烯l酸酯為基球生產(chǎn)的Protein A 介質(zhì)相比具有溶脹系數(shù)小、壓縮比例低、而且機械性能強。實驗證明 UniMab在2公斤裝柱壓力下，其柱床壓縮比例只有5%，而無論是GE 生產(chǎn)的以瓊脂糖為基球還是Tosoh 生產(chǎn)的低交聯(lián)聚合物為基球的Protein A 介質(zhì)壓縮比例往往超過15%。