基因敲除免疫疾病模型「英瀚斯」

大鼠腦缺血再灌注模型

造模方法

大鼠麻zui仰臥固定于恒溫手術(shù)臺(tái)上。將幾種不同的應(yīng)激因子在實(shí)驗(yàn)全程中應(yīng)用，順序隨機(jī)，使動(dòng)物不能預(yù)料刺激的發(fā)生。暴露頸總動(dòng)脈頸（CCA），分離頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）和頸外動(dòng)脈（ECA）。CCA近心端結(jié)扎并另備線，ICA遠(yuǎn)端放置微型動(dòng)脈夾，在CCA靠近分叉處插入魚線，即線栓由頸內(nèi)動(dòng)脈分叉處計(jì)長(zhǎng)度為1.85±0.05cm，說明絲線頭端己到達(dá)ICA分支MCA以和大腦前動(dòng)脈（ACA）的分叉處，阻斷了同側(cè)ICA和經(jīng)ACA來自對(duì)側(cè)ICA的血供，缺血1h。

手術(shù)造模圖片

病理判定圖片

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組

(一)分組的原則：進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，經(jīng)常需要將選擇好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按研究的需要分成若干組。能改善jia亢模型大鼠甲狀腺組織病理變化,其中高劑量組甲狀腺組織結(jié)構(gòu)基本同正常組。動(dòng)物分組應(yīng)按隨機(jī)分配的原則，使每只動(dòng)物都有同等機(jī)會(huì)被分配到各個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中去，以避免各組之間的差別,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，特別是進(jìn)行準(zhǔn)確的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn),必須在隨機(jī)分組的基礎(chǔ)上進(jìn)行。

每組動(dòng)物數(shù)量應(yīng)按實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)短、實(shí)驗(yàn)類型及統(tǒng)計(jì)學(xué)要求而定。如果是慢性實(shí)驗(yàn)或需要定期處死動(dòng)物進(jìn)行檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)，就要求選較多的動(dòng)物，以補(bǔ)足動(dòng)物自然和認(rèn)為處死所喪失的數(shù)量，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)有合乎統(tǒng)計(jì)學(xué)要求的動(dòng)物數(shù)量存在。

(二)建立對(duì)照組：分組時(shí)應(yīng)建立對(duì)照組。例如用一次定量放血法可造成出血，會(huì)si亡，這就符合可重復(fù)性和達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)化要求。1.自身對(duì)照組：是指實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)而言。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身在實(shí)驗(yàn)處理前、后兩個(gè)階段的各項(xiàng)相關(guān)數(shù)據(jù)就分別是對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，此法可排除生物間的個(gè)體差異。2.平行對(duì)照組：有正對(duì)照組和負(fù)對(duì)照組兩種。給實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物某種處理，而給正對(duì)照組用同樣方法進(jìn)行處理，但并不采用實(shí)驗(yàn)所要求的或手段，負(fù)對(duì)照組則不給任何處理。3.具體分組時(shí)，應(yīng)避免人為因素, 隨機(jī)把所有的動(dòng)物進(jìn)行編號(hào)，然后令其雙數(shù)為Ａ組(實(shí)驗(yàn)組),單數(shù)為B組(對(duì)照組)即可或反之。如果要分若干個(gè)組時(shí)，應(yīng)該用隨機(jī)數(shù)字表示進(jìn)行完全隨機(jī)分組。

抑yu癥應(yīng)激動(dòng)物模型

(一)行為絕望模型

行為絕望模型具有簡(jiǎn)單、快速、敏感等特點(diǎn)，常用于抗抑郁yao物的快速篩選。小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)：懸尾小鼠為克服不正常體位而掙扎活動(dòng)，但活動(dòng)一定時(shí)間后，出現(xiàn)間斷性不動(dòng)，顯示“絕望”狀態(tài)，多數(shù)抗抑郁藥可有效縮短小鼠的不動(dòng)時(shí)間。

(二)獲得性無助模型

獲得性無助是一種當(dāng)大鼠接受無法控制或預(yù)知的厭惡xing刺激后，將其放在可以逃避dian擊的環(huán)境中時(shí)，呈現(xiàn)出的逃避行為欠缺的現(xiàn)象，同時(shí)可伴有如食欲減退、體重減輕、運(yùn)動(dòng)性活動(dòng)減少、攻擊性降低等現(xiàn)象。人類gan臟不含dan堿氧化酶，不存在dan堿缺乏問題，所以此模型不適于在發(fā)病機(jī)制上進(jìn)行人類相關(guān)疾病的研究。多種臨床對(duì)抑yu癥有效的yao物和zhi療方法可逆轉(zhuǎn)“獲得性無助”現(xiàn)象。

(三)慢性不可預(yù)見性應(yīng)激模型

大鼠經(jīng)歷一系列嚴(yán)重的應(yīng)激因子(如噪聲、強(qiáng)光刺激、長(zhǎng)時(shí)間行為限制等)后表現(xiàn)出活動(dòng)能力下降。小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)：懸尾小鼠為克服不正常體位而掙扎活動(dòng)，但活動(dòng)一定時(shí)間后，出現(xiàn)間斷性不動(dòng)，顯示“絕望”狀態(tài)，多數(shù)抗抑郁藥可有效縮短小鼠的不動(dòng)時(shí)間。將幾種不同的應(yīng)激因子在實(shí)驗(yàn)全程中應(yīng)用，順序隨機(jī)，使動(dòng)物不能預(yù)料刺激的發(fā)生。主要模擬了人類yi郁的核心癥狀即快感缺乏，同時(shí)模擬了其他重型yi郁障礙的癥狀表現(xiàn)。如運(yùn)動(dòng)能力及社會(huì)交往能力下降、探索行為能力下降、qin犯攻擊能力缺陷、xing行為能力下降等。

(四)孕期應(yīng)激致子代抑郁模型

出生前暴露在應(yīng)激條件下的SD大鼠，成年期會(huì)出現(xiàn)持續(xù)的行為、神經(jīng)內(nèi)分泌和睡眠結(jié)構(gòu)等改變，如行為焦躁、HPA軸功能亢進(jìn)、矛盾睡眠增加，并與血漿皮質(zhì)酮水平高度相關(guān)。在睡眠中的突出變化在很大程度上與yi郁障礙患者相似。

(五)社會(huì)挫敗模型

具代表性的是地鼠的壓抑模型，它是人為地將雄性地鼠配對(duì)飼養(yǎng)在同一環(huán)境中。兩鼠之間會(huì)有“強(qiáng)”、“弱”之分，在“強(qiáng)”鼠面前，“弱”鼠出現(xiàn)體重減輕、自主活動(dòng)減少、 HPA軸及交感神經(jīng)亢奮的表現(xiàn)。這些癥狀可在一定程度上被一定劑量的抗yi郁藥反轉(zhuǎn)。

雄ji素多囊卵chao綜合征動(dòng)物模型

  方法①丙酸gao丸酮造模法：選出生后9d齡雌性大鼠，按1.25mg/只的劑量經(jīng)頸背部一次性皮注射丙酸gao丸酮，21d齡斷乳后動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食。Step2：注射STZ溶液：術(shù)前禁食12小時(shí)，之后進(jìn)行給藥處理。模型動(dòng)物70d齡起連續(xù)作涂片11d，觀察到上皮持續(xù)角化者即為造模成功。模型動(dòng)物xue清中4-xiong烯二酮、總gao酮、游離gao酮、胰島素(Ins)和C-肽均顯著升高。②脫氫表雄酮造模法：選23d齡幼年雌性大鼠，按6mg/100g體重的劑量每天經(jīng)皮注射脫氫表雄酮，連續(xù)20d。注射脫氫表雄酮后，模型動(dòng)物的luan巢重量顯著增加并呈多囊樣改變，對(duì)閉鎖luan泡進(jìn)行顯微測(cè)量其平均直徑明顯增大。模型動(dòng)物血qingT、E2和空腹血糖水平明顯升高，空腹及服糖后2h血胰島素水平顯著升高。

2 雌多囊卵chao綜合征動(dòng)物模型

方法  選用未交配雌性成年大鼠，一次性注射戊酸雌二醇2mg/只，16～20d后大鼠上皮出現(xiàn)持續(xù)角化。如作的研究工作，就必須了解哪種動(dòng)物是高癌種，哪種是低癌種，各種動(dòng)物自發(fā)性的發(fā)生率是多少。出現(xiàn)大量閉鎖luan泡，由于正常luan泡數(shù)減少luan巢體積縮小的。xue清LH和FSH水平在10～12d時(shí)降至zui低，以后逐漸上升至56d時(shí)恢復(fù)正常。至56dluan巢呈現(xiàn)多囊樣改變，6個(gè)月后該病理改變呈漸進(jìn)性發(fā)展趨勢(shì)。