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耐低溫生物菌種-選擇開碧源
水醫(yī)生--開碧源從17年開始就和清華大學(xué)及北京云陽(yáng)張環(huán)保設(shè)備廠聯(lián)合將耐低溫菌種從實(shí)驗(yàn)室的小試走向規(guī)?;闹性嚕诒本╉樍x馬坡工業(yè)區(qū)污水廠進(jìn)行耐低溫菌種的耐低溫中試驗(yàn)證,倆套一模一樣AO氧化接觸工藝的日處理10噸的污水中試設(shè)備,從5月份開始同時(shí)培養(yǎng)微生物,一套投加耐低溫生物菌種,一套沒有投加耐低溫菌種,馴化培養(yǎng)運(yùn)行30天后,開始定期取樣檢測(cè),經(jīng)對(duì)比驗(yàn)證,添加耐低溫菌種的中試設(shè)備,從掛膜速度及COD氨氮磷及總氮的去除率,都比沒有添加耐低溫菌種的中試設(shè)備高10--30%,中試一直連續(xù)運(yùn)行到冬天,沒有添加耐低溫菌種的中試設(shè)備做保溫和加蓋處理,添加耐低溫菌種的中試設(shè)備沒有做保溫和加蓋處理。,沒有做保溫的中試設(shè)備,水溫達(dá)到3.5度(保持在5度左右),水面已經(jīng)結(jié)冰,做保溫加蓋的中試設(shè)備,水面沒有結(jié)冰,水溫保持在10度左右,進(jìn)水量和進(jìn)水水質(zhì)指標(biāo)都一樣,持續(xù)低溫運(yùn)行,并連續(xù)取樣化驗(yàn),做保溫的中試設(shè)備,進(jìn)水和出水幾乎一致,證明:普通菌種在水溫10度的時(shí)候,已經(jīng)停止工作,幾乎沒有任何降解能力。
低溫生物菌種貯存的方式
1.冷凍真空干燥法。將已培養(yǎng)、生長(zhǎng)豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的、卵白、脫脂奶制成菌懸液,將懸液以無(wú)菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中,每管約0.3-0.5毫升,然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接,安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍,并在冷凍狀態(tài)下抽空干燥,并在真空狀態(tài)下熔封安瓿,在-20℃保存,一般可保存十年以上,但成本較高。
2.液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的菌種制成菌懸液備用;其次,準(zhǔn)備安瓿瓶,每瓶加入0.8毫升冷凍保護(hù)劑10%(體積比)甘油蒸餾水溶液,塞棉塞滅菌(1公斤/平方厘米,5分鐘)。無(wú)菌檢查后,接入要保藏的菌種,火焰熔封瓶口,檢查是否漏氣,將封好口的安瓿瓶放在凍結(jié)器內(nèi),以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫,使保藏品逐步均勻地凍結(jié),直至-35℃,以后凍結(jié)速度就不需控制,安瓿凍結(jié)后立即放入液氮罐內(nèi),在-150至-196℃保藏,該法只有少數(shù)科研院所使用。
低溫生物菌種的冷凍干燥保藏法
(1)準(zhǔn)備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造,形狀可用長(zhǎng)頸球形底的,亦稱淚滴型安瓿管(圖Ⅶ-15),大小要求外徑6-7.5mm,長(zhǎng)105mm,球部直徑9-11mm,壁厚0.6-1.2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞,1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘,備用。
(2)準(zhǔn)備菌種,用冷凍干燥法保藏的菌種,其保藏期可達(dá)數(shù)年至十?dāng)?shù)年,為了在許多年后不出差錯(cuò),故所用菌種要特別注意其純度,即不能有雜菌污染,然后在適培養(yǎng)基中用適溫度培養(yǎng),使培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物。細(xì)菌和酵母的菌齡要求超過對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,若用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌種進(jìn)行保藏,其存活率反而降低。一般,細(xì)菌要求24-48小時(shí)的培養(yǎng)物;酵母需培養(yǎng)3天;形成孢子的微生物則宜保存孢子;線菌與絲狀真菌則培養(yǎng)7-10天。
(3)制備菌懸液與分裝以細(xì)菌斜面為例,用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中,制成濃菌液,每支安瓿管分裝0.2ml。
(4)冷凍冷凍干燥器有成套的裝置出售,價(jià)值昂貴,此處介紹的是簡(jiǎn)易方法與裝置,可達(dá)到同樣的目的。
將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍,無(wú)低溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2>)酒精的液或干冰酮液,溫度可達(dá)-70℃。將安瓿管插入冷凍劑,只需冷凍4-5分鐘,即可使懸液結(jié)冰。
低溫生物菌種德選育和培養(yǎng)
要看你選什么規(guī)模的發(fā)酵是小試還是中試還是生產(chǎn)?另外,你說的菌種選育里應(yīng)該是包括了培養(yǎng)基配制和擴(kuò)大培養(yǎng)。所以,只能大概列一下。
菌種選育:超低溫冰箱、無(wú)菌室、培養(yǎng)箱、搖床、分光光度計(jì)、檢測(cè)設(shè)備。
培養(yǎng)基配制:電子天平、pH計(jì)、滅菌鍋、微波爐、電磁爐、冰箱。
擴(kuò)大再培養(yǎng):滅菌鍋、搖床、抽濾瓶(或特質(zhì)金屬瓶)、空調(diào)機(jī)組、臭氧發(fā)生器。
發(fā)酵:配料罐、種子罐、發(fā)酵罐、補(bǔ)料罐(小試用流加泵)、有時(shí)會(huì)用到在線監(jiān)測(cè)設(shè)備如乙醇檢測(cè)儀、生物傳感器、分光光度計(jì)等、空壓機(jī)、。
分離提純:制水設(shè)備、制冷設(shè)備、濃縮機(jī)、細(xì)胞破碎儀、離心機(jī)、陶瓷膜、真空干燥設(shè)備、超低溫冷干機(jī)、造粒設(shè)備(不同產(chǎn)品用到不同的烘干設(shè)備)等,不同工藝所用設(shè)備也不同