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低溫生物菌種怎么保藏
菌種保藏(culture preservation,culture collection)是指保持微生物菌株的生活力和遺傳性狀的技術(shù)?;蚪?jīng)人工選育得到的變異型純種,使其存活、不丟失、不污染雜菌、不發(fā)生或少發(fā)生變異,保持菌種原有的各種特征和生理活性?;驹硎鞘刮⑸锏纳顒?dòng)處于休眠狀態(tài),也就是使微生物的新陳代謝作用限制在低范圍內(nèi)。干燥、低溫和隔絕空氣是保證獲得這種狀態(tài)的主要措施。有針對性地創(chuàng)造干燥、低溫和隔絕空氣的外界條件,就是微生物菌種保藏的基本技術(shù)。常用的方法有凍干保藏法、深低溫保藏法、液氮保藏法、礦油封藏法、固體曲保藏法、砂土管保藏法、瓊脂穿刺保藏法等。日常工作中,常選用4℃冰箱進(jìn)行短時(shí)間的菌種保藏
低溫生物菌種知多少?
實(shí)驗(yàn)室菌種的傳代保藏過程
1. 按菌種說明書要求復(fù)溶菌粉,轉(zhuǎn)種于適當(dāng)?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)(G1),復(fù)壯后轉(zhuǎn)接至平板上,并于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間,分離出單個(gè)純種菌落,此為第2代(G2)。
2. 菌種鑒定完成后,挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管,同時(shí)挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面菌種作為工作用菌種。此時(shí),保藏菌種為第2代,但工作用菌種則為第三代。
3. 將第2代菌種管冷凍保存,將工作用菌種于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后可用于試驗(yàn)。
4. 取一支冷凍保存的G2代菌種轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上,平板上的菌種制成冷凍保藏管第三代(G3),斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后用作工作用菌種(W3)。
5. 將第三代菌種(G3)冷凍或低溫保存,將生長、轉(zhuǎn)種后的G2菌種經(jīng)滅菌處理后丟棄。
6. 當(dāng)工作用菌種代數(shù)小于5時(shí),可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種,如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。
7. 按上述程序操作,直至G4轉(zhuǎn)為W5為止,需重新開啟安瓿,再重復(fù)上述操作程序、保藏和使用菌種。
以上方法中,菌種被分為兩類。傳代用菌種和工作用菌種,傳代用菌種用于甘油冷凍管法保藏,工作用菌種用斜面低溫保藏法保藏。
實(shí)驗(yàn)證明,甘油冷凍管的有效期至少為2年,但其主要適用于細(xì)菌(需氧)、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細(xì)菌則需應(yīng)用其它方法。
生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種安全性分析
雖然目前生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種大多采用植物根際促生菌, 但近年來很多研究發(fā)現(xiàn),芽孢菌屬和類芽孢菌個(gè)別菌株能產(chǎn)生菌素。 即便在菌種安全分級目錄中列為一級免做理學(xué)試驗(yàn)的菌種, 如枯草芽孢菌、 多類芽孢菌、 地衣芽孢菌等個(gè)別菌株也檢測到部分溶血素基因, 潛在危害不容忽視。 因此, 開展生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種生物安全風(fēng)險(xiǎn)評價(jià), 從源頭上把好菌種安全關(guān)是產(chǎn)品質(zhì)量安全的首要保障。通過調(diào)研發(fā)現(xiàn), 用于生物有機(jī)肥產(chǎn)品的部分生產(chǎn)菌種分類地位不明確, 甚至混亂, 難以從源頭上進(jìn)行安全風(fēng)險(xiǎn)的初步識(shí)別 。 以常見生產(chǎn)菌種枯草芽孢菌為例, 實(shí)際上是一個(gè)表型相似的群體, 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 (萎縮) 芽孢菌、莫哈韋(莫杰夫) 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索諾拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹羅芽孢菌等 10個(gè)緣種。生產(chǎn)企業(yè)送檢的枯草芽孢菌生物有機(jī)肥產(chǎn)品, 經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)很多產(chǎn)品實(shí)際為解淀粉芽孢菌, 且許多菌株具有很強(qiáng)的溶血作用。通過對生產(chǎn)企業(yè)調(diào)研發(fā)現(xiàn), 部分生產(chǎn)企業(yè)選擇分離于動(dòng)物腸道的解淀粉芽孢菌作為產(chǎn)品生產(chǎn)用菌株, 該類菌種生產(chǎn)發(fā)酵周期短、 活菌數(shù)量高、 生產(chǎn)成本低, 但產(chǎn)品的應(yīng)用功效不佳, 溶血風(fēng)險(xiǎn)大 , 建議慎用。而植物來源的解淀粉芽孢菌溶血風(fēng)險(xiǎn)小, 產(chǎn)品應(yīng)用效果好, 推薦使用。
低溫生物菌種處理的優(yōu)勢
我國北方污水處理一直受到低溫影響,尤其氨氮處理效果差、出水難以達(dá)標(biāo)等問題的困擾。目前污水廠一般采用增加污泥濃度、水力停留時(shí)間、池體保溫加蓋等措施以提高處理效果,但投資和運(yùn)行費(fèi)用增加的問題也隨之而來。溫度降低所導(dǎo)致的生物處理效果下降,歸根結(jié)底是由于當(dāng)水溫低于15℃時(shí),處生化系統(tǒng)中存在的低溫微生物的數(shù)量和活性不能達(dá)到常溫下中溫菌的水平,污水中的有機(jī)污染物質(zhì)不能被迅速降解所導(dǎo)致的。因此,采用投加耐低溫生物菌劑的方式對東北地區(qū)污水處理廠生化處理系統(tǒng)的耐低溫菌種改良,對低溫快速啟動(dòng)和污水處理廠污水穩(wěn)定達(dá)標(biāo)排放意義重大。