細胞實驗外包優(yōu)選企業(yè)【英瀚斯】

細胞增殖檢測

     本公司應用MTT比色法， 檢測細胞存活和生長。其檢測原理為huo細胞內線粒體中的琥珀酸脫氫酶能催化外源性無色的MTT形成藍色的結晶Formazan，并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二jia基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的Formazan，用酶聯(lián)mian疫檢測儀在一定波長處測定其光吸收值，可間接反映huo細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。常用的染色法包括臺盼藍、橙/化乙啶（AO/EB）、Giemsa和HE法等。

     該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫liu藥wu篩選、細胞毒性試驗、以及腫liu放she敏感性測定等。服務內容      1. 細胞接種：收到客戶細胞后，我們會用細胞計數(shù)板計數(shù)細胞，得出細胞懸液濃度。計算出應稀釋的倍數(shù)，按MTT試劑盒要求在96孔板內接種 相應濃度的細胞懸液；7%兩個濃度的低溶點瓊脂糖液，高壓滅菌后，維持在40日中不會凝固。

     2. 細胞培養(yǎng)：然后在無菌恒溫細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng)接種好的96孔細胞培養(yǎng)板，并實時觀察細胞狀態(tài)；  

     3. yao物處理并呈色：按不同濃度梯度加入yao物作用細胞；

     4. 溶解，比色：加入MTT檢測試劑，按操作要求孵育相應時間，在mei標儀內檢測對照組和實驗組的吸光值。并處理數(shù)據(jù)得出比色結果。

軟gu細胞培養(yǎng)

(1)豚鼠脫頸處死，備皮，用75%酒精消毒背部及四肢皮膚。

(2)無菌操作下取下雙側股骨頭及膝關節(jié)(保留周圍肌肉，軟gu不能暴露)，75%酒精浸泡5分鐘，轉移至PBS緩沖液中，帶入超凈工作臺，剔除關節(jié)周圍附著的軟組織，打開髖、膝關節(jié)，用尖刀削取關節(jié)軟gu組織，置入裝有PBS緩沖液的無菌培養(yǎng)皿，防止軟gu組織被風干。同時還可以使用獲得的測序結果進行專利等知識產權方面的申請審批。

(3)PBS緩沖液充分漂洗軟gu小塊3次，然后用小剪刀將軟gu塊切碎至約Imm3大小。

(4)再次用PBS緩沖液沖洗3次，濾干，將細小的軟gu塊置入放有0.2%的II型膠原酶3ml的廣口瓶里，搖勻后置于37°C恒溫震蕩箱中消化，40分鐘后將上層消化液轉移至15ml規(guī)格離心管中，800r/min離心5min,收集細胞(沉淀物),加入含10%的胎牛xue清DMEM培養(yǎng)液4ml并吹打混勻，制成軟gu細胞混懸液。2)陽性CD117(c-kit)陰性特點用流式細胞儀將精原gan細胞分選出來,并在體外進行培養(yǎng)嘗試。

(5)把消化所得的軟gu細胞混懸液收集于離心管中，經濾網(wǎng)過濾后用細胞計數(shù)板計數(shù),并把細胞混懸液密度調整為2x105/ml接種于25cm2規(guī)格的培養(yǎng)瓶中。將培養(yǎng)瓶放置于CO2培養(yǎng)箱內。培養(yǎng)條件為37°C、5%CO2。

(6)未消化完的軟gu小塊繼續(xù)用II型膠原酶如_上法消化，直至軟gu塊基本消失。

(7)每日在倒置顯微鏡下觀察軟gu細胞生長情況并拍照保存。

BrdU染色原理

 BrdU (5-脫氧尿核苷)是胸腺的衍生物，常用于標記中新合成的DNA,可代替胸腺選擇性整合到細胞中新合成的DNA中(細胞周期S期)。這種摻入可以穩(wěn)定存在，隨著DNA進入子細胞中BrdU特異性可以用于檢測BrdU的摻入，從而判斷細胞的增殖能力。BrdU特異性可以用于檢測BrdU的摻入，從而判斷細胞的增殖能力。細胞組技術人員畢業(yè)于東南大學、華中科技大學等高校生物學相關專業(yè)，具有碩士研究生以上學歷，熟練掌握細胞學相關實驗，可開展多種細胞實驗。

注射或細胞培養(yǎng)后利用抗Brdu單，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。因組織細胞內無內源性Brdu存在，所以Brdu應用較廣摻入雙鏈DNA內的Brdu,以氫鏈與腺呤結合，不能直接與抗Brdu反應，需經解鏈使Brdu暴露方能被染色。常用的解鏈方法為鹽酸加熱、蛋白酶處理等，使DNA雙鏈部分單鏈化，抗Brdu小鼠單與增殖細胞核內的Brdu結合，再經酶標抗小鼠IgG孵育、



呈色，顯示進入S期細胞的情況。AnnexinV是Ca2 依賴的磷脂結合蛋白，對PS有很高的親和性，并且可以與暴露于細胞外的PS相結合。