低溫生物菌種廠家常用解決方案【開碧源】

低溫生物菌種怎么保藏

菌種保藏(culture preservation，culture collection)是指保持微生物菌株的生活力和遺傳性狀的技術(shù)?；蚪?jīng)人工選育得到的變異型純種，使其存活、不丟失、不污染雜菌、不發(fā)生或少發(fā)生變異，保持菌種原有的各種特征和生理活性。基本原理是使微生物的生命活動(dòng)處于休眠狀態(tài)，也就是使微生物的新陳代謝作用限制在低范圍內(nèi)。干燥、低溫和隔絕空氣是保證獲得這種狀態(tài)的主要措施。有針對(duì)性地創(chuàng)造干燥、低溫和隔絕空氣的外界條件，就是微生物菌種保藏的基本技術(shù)。常用的方法有凍干保藏法、深低溫保藏法、液氮保藏法、礦油封藏法、固體曲保藏法、砂土管保藏法、瓊脂穿刺保藏法等。日常工作中，常選用4℃冰箱進(jìn)行短時(shí)間的菌種保藏

低溫生物菌種的孢子分離法

( 1 )褶上涂抹法:選取新鮮、健壯、未開傘、的子實(shí)體，洗凈后用0 75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)馬林熏蒸消毒12 ~ 24 小時(shí)，再按無菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實(shí)體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種，，然后置于25 ~ 28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。

( 2 )孢子印采集法:取滅過菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開傘或未開裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24 小時(shí)后，便落下孢子，形成印痕(即孢子印)。然后，用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，可得純菌種。

( 3 )孢子收集器采集法:孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤等組成。鐘罩下為一搪瓷盤，直徑25 厘米左右，盤內(nèi)先墊襯4~6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養(yǎng)皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養(yǎng)皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個(gè)孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時(shí)。

低溫生物菌種的復(fù)壯措施

① 純種分離。采用平板劃線分離法、稀釋平板法或涂布法均可。把仍保持原有典型優(yōu)良性狀的單細(xì)胞分離出來，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)恢復(fù)原菌株的典型優(yōu)良性狀，若能進(jìn)行性能測(cè)定則更好。還可用顯微鏡操縱器將生長(zhǎng)良好的單細(xì)胞或單孢子分離出來，經(jīng)培養(yǎng)恢復(fù)原菌株性狀。

② 通過寄主體內(nèi)生長(zhǎng)進(jìn)行復(fù)壯(如Bacillus thuringiensis的復(fù)壯)。主要是對(duì)一些寄生性的菌株，可以將衰的菌株接種到相應(yīng)的宿主體內(nèi)，提高其寄生性能及其它性能。

③ 淘汰已衰的個(gè)體(采用比較激烈的理化條件進(jìn)行處理，以殺生命力較差的已衰個(gè)體)?？梢圆捎酶鞣N外界不良理化條件,使發(fā)生衰的個(gè)體死去,從而留下群體中生長(zhǎng)健壯的個(gè)體.如:對(duì)"5406"抗生菌的分生孢子進(jìn)行-30-10度的低溫處理5-7天,使80%死去,在抗低溫個(gè)體中可找到健壯的個(gè)體.

④ 采用有效的菌種保藏方法。