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啟動(dòng)子篩選電話(huà)「思特進(jìn)」

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發(fā)布時(shí)間:2021-09-25 09:34  






武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);從圖B中發(fā)現(xiàn)GaMYB2-GFP的融合表達(dá)載體只能在細(xì)胞核中能看到綠色熒光,這進(jìn)一步證明該蛋白不具有跨膜蛋白結(jié)構(gòu),定位在細(xì)胞核中,具有轉(zhuǎn)錄因子的一般特征??梢蚤_(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。





目的研究1個(gè)白木香倍半萜合酶(ASS)的亞細(xì)胞定位,確定其功能區(qū)域,并比較3種瞬時(shí)表達(dá)體系在亞細(xì)胞定位研究中的優(yōu)劣。方法從白木香愈傷組織中提取總RNA,采用特異引物RT-PCR方法倍半萜合酶ASS基因,并連接于pEZS-NL載體和pFGC5941GFP改造載體上,分別構(gòu)建pFGC5941-GFP-ASS、pEZS-NL-ASS-GFP 2種植物表達(dá)載體,分別利用根癌農(nóng)侵染葉片、基因槍轟擊洋蔥表皮細(xì)胞、PEG轉(zhuǎn)化白木香原生質(zhì)體3種技術(shù)進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)化表達(dá),激光共聚焦顯微鏡下觀察表達(dá)出的綠色熒光蛋白(GFP)融合蛋白的亞細(xì)胞定位。結(jié)果在葉片表皮細(xì)胞、洋蔥表皮細(xì)胞及白木香原生質(zhì)體中,融合蛋白綠色熒光均能被觀察到。ASS基因與GFP的融合蛋白產(chǎn)物在葉片中定位于胞質(zhì),在洋蔥表皮中定位于胞質(zhì)和細(xì)胞核,白木香原生質(zhì)體中定位于胞質(zhì)和質(zhì)體。方法構(gòu)建2種GFP標(biāo)簽蛋白質(zhì)表達(dá)載體,分別在GFP的N和C端預(yù)留位點(diǎn),以目的基因。結(jié)論 ASS基因在白木香原生質(zhì)體胞質(zhì)及質(zhì)體定位;對(duì)3種體系的結(jié)果比較表明,應(yīng)用不同體系研究蛋白的亞細(xì)胞定位可能出現(xiàn)不同的結(jié)果,這可能與同源或異源表達(dá)的植物細(xì)胞的特性有關(guān)。


武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);oryzae)的Harpin蛋白編碼基因hrf1轉(zhuǎn)化水稻,獲得的轉(zhuǎn)基因株系NJH12能夠提高對(duì)水稻稻瘟病、水稻白葉枯病和干旱的抗性??梢蚤_(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。




多胺作為一種多聚陽(yáng)離子,在基因表達(dá)、蛋白活性等多層面調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白能夠特異性介導(dǎo)多胺類(lèi)物質(zhì)跨膜運(yùn)輸,在調(diào)節(jié)多胺濃度、調(diào)控抗性基因表達(dá)、維持mRNA水平、增強(qiáng)植物抗逆性等方面具有重要功能。目前,已知擬南芥(Arabidopsis thaliana)LHR1基因編碼質(zhì)膜多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白AtPUT3,控制多胺的吸收,參與植物熱脅迫早期反應(yīng)中的分子調(diào)控過(guò)程,但水稻中(Oryza sativa),多胺參與植物熱脅迫早期反應(yīng)的具體分子機(jī)制尚不明確。通過(guò)序列對(duì)比,發(fā)現(xiàn)水稻Os02g47210和Os03g37984是擬南芥AtPUT3的功能同源基因。已有研究表明轉(zhuǎn)錄因子NF-YB家族參與了植物的花期調(diào)控的光周期途徑和逆境調(diào)控。為了初步闡明水稻多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白LHR1在熱脅迫早期防御反應(yīng)及提高植物耐熱性上的功能,本研究利用生物信息學(xué)、生化與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、遺傳學(xué)等手段對(duì)水稻LHR1同源基因的功能進(jìn)行初步研究,結(jié)果如下:1.了水稻OsLHR1(Os03g37984.1、2、3和Os02g47210)基因全長(zhǎng)CDS,并對(duì)該基因編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行有效的生物信息學(xué)分析,結(jié)果顯示:Os03g37984有5種不同的剪切方式,編碼5種OsPUT3蛋白。


武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);N素供應(yīng)對(duì)甜瓜的生長(zhǎng)發(fā)育、果實(shí)的產(chǎn)量和品質(zhì)形成有非常重要的影響,目前甜瓜N素代謝研究還停留在N營(yíng)養(yǎng)生理與果實(shí)品質(zhì)及產(chǎn)量層面,在分子機(jī)理水平的研究報(bào)道很少,尤其是對(duì)與N素同化和利用效率緊密相關(guān)的GS酶基因的研究還是空白。可以開(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。




以苧麻優(yōu)良品系'5041-3'子葉作為受體,利用根癌農(nóng)介導(dǎo)法進(jìn)行了綠色熒光蛋白基因的遺傳轉(zhuǎn)化研究,農(nóng)菌株為EHA105,重組質(zhì)粒為pBINm-GFP5-ER。經(jīng)農(nóng)浸染后的子葉外植體經(jīng)過(guò)共培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)、伸長(zhǎng)培養(yǎng)和生根培養(yǎng)后再生出抗性植株,對(duì)抗性植株的再生過(guò)程進(jìn)行了GFP熒光檢測(cè),結(jié)果表明,GFP基因能在苧麻中強(qiáng)烈表達(dá),證明GFP基因能夠在苧麻遺傳轉(zhuǎn)化中得到應(yīng)用。對(duì)抗性植株的Southern雜交檢測(cè)證實(shí)外源基因已整合到苧麻基因組中。作為柑橘類(lèi)落葉果樹(shù),枳/早實(shí)枳與大多數(shù)落葉的草本植物相似,需要經(jīng)過(guò)冬季低溫誘導(dǎo)(春化作用)才能開(kāi)花。


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