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反相色譜分離后,如何快速從流動相中得到產(chǎn)品?
可以考慮先在低溫下,減壓旋蒸除去其中的有機的溶劑,然后用萃取的方法把產(chǎn)品萃取出來,然后再低溫再旋蒸,這樣,就可以不將溫度升得很高而得到產(chǎn)品。如果要直接蒸掉流動相,水泵的真空度要注意(要檢查氣密性),否則蒸水會很慢。一般比較好的泵在60~70度即可蒸掉水,如果泵的真空度不好,可能需要80~90度才行,這樣容易暴沸導致樣品損失。溫度太高可能引起物質(zhì)變性。
制備色譜的填充
填料是工業(yè)制備色譜的血脈,填料的選擇和利用是非常關(guān)鍵的,目前已有越來越多的產(chǎn)品應用到IPC中。填料的化學性質(zhì)和物理性質(zhì)決定了色譜的分離性能和動力學性能。應用于大規(guī)模工業(yè)化制備色譜中的填料具有如下特殊的要求?! ?
1、機械強度高:填料需要承受很大的機械壓力,因為填料在IPC使用中,需要經(jīng)常裝卸,機械性能差的填料經(jīng)受不住反復填充,它們易破碎,產(chǎn)生細顆粒,降低柱滲透性,甚至堵塞濾片,造成流速分布不均勻,影響分離產(chǎn)物的純度,在系統(tǒng)中產(chǎn)生極高的柱壓而無法繼續(xù)使用引?! ?
2、負載量大:在IPC中,填料的負載量越大,則單位體質(zhì)量填料可處理的原料量就可增加,因而提高了產(chǎn)率。選擇合適孔徑及孔徑分布的填料是獲得高負載量的一個關(guān)鍵因素?! ?
3、可大量供應,批間的重現(xiàn)性好:制備色譜工藝過程要擴大,必須有可靠的供貨源提供大量填料,否則無法實現(xiàn)工業(yè)化。填料各批量之間的化學和機械穩(wěn)定性、孔結(jié)構(gòu)及可重復的比表面積等必須具有高度的重現(xiàn)性,否則難以保證長期、持續(xù)、穩(wěn)定的分離與純化生產(chǎn)工藝。
4、合適的顆粒大小和窄的粒度分布范圍:細顆??稍黾铀鍞?shù)及分辨率,但同時引起裝柱困難,需要更高的操作壓力。
工業(yè)制備色譜
工業(yè)色譜又稱制備色譜。利少{J組分的差速遷移而實現(xiàn)I.業(yè)規(guī)?;旌衔锓蛛x的方法它包括一個流動相(被分離的氣相或液相)和一個固定相。兩相在色譜柱r},進行接觸,在色譜柱‘l,流動相沿固定相流動,由」幾混合物中各組分被固定相滯流程度不同,它們隨流動相移動的速度就不同,因而可使各組分.4.相分離。根據(jù)流動相的不}.可,可分為}L相色譜與液相色譜兩類。根據(jù)固定相的類型,可分為吸附色譜、分配色iH離子交換色譜、親和色潛‘排I}}L色譜五類。上業(yè)色譜可分離選擇性系數(shù)非常接近的組分,它適用于熱敏N}物質(zhì)的分離,對制備高純物質(zhì)特別有效
蛋白質(zhì)的特點使得其分離過程與傳統(tǒng)化工分離過程有著極為不同的特點:(1)分離對象是具有特定的生物活性的生物大分子產(chǎn)品,分離過程設(shè)計中不恰當?shù)奈锢砗突瘜W環(huán)境等(如溫度、PH值、緩沖液選擇、、攪拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,從而使之失活;(2)由于發(fā)酵液、細胞培養(yǎng)液或勻漿液中,我們所需要的目標產(chǎn)物往往存在于含有許多性質(zhì)十分相似的雜質(zhì)的稀溶液中,如何從這樣一種復雜的稀溶液中經(jīng)濟有效地提取產(chǎn)物是生物分離技術(shù)面臨的重大課題;(3)從衛(wèi)生和安全角度出發(fā),對于用基因工程產(chǎn)品,有著極高的純度和同一性要求,對其中的有害雜質(zhì)去除率要求極高,對分離設(shè)備材質(zhì)和分離過程中引入的分離介質(zhì)也有著嚴格的限制。