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廣州碩譜生物科技有限公司,SPE小柱,是目前國內(nèi)生產(chǎn)SPE小柱較好的生產(chǎn)廠家。氨丙基SPE柱批發(fā)
為何在 SPE操作中會(huì)出現(xiàn)流速非常慢或流速不一致,回收率較低,且平行性差?也許很多小伙伴都遇到過這樣的問題。小子選錯(cuò)了,方法有問題嗎?或者填充材料的粒度分布不均勻,填充松緊度不穩(wěn)定?實(shí)際上 SPE小柱每批流速都有嚴(yán)格的質(zhì)量控制范圍,在質(zhì)量控制范圍內(nèi)的小柱可以保證穩(wěn)定的流速,超出質(zhì)量控制范圍的小柱將作為異常品處理。那么,是否可以采用一種穩(wěn)定的方法,用出廠流速測試合格
實(shí)際上還有一個(gè)很容易被大家忽視的細(xì)節(jié)也會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)速度過慢: SPE小柱在運(yùn)輸過程中篩板和填料可能會(huì)發(fā)生微小的松動(dòng),導(dǎo)致空氣進(jìn)入填料(一般不容易被肉眼看到),含氣填料在氣壓下會(huì)導(dǎo)致溶劑流動(dòng)緩慢。這一點(diǎn)大家都能理解,為什么同一批小柱子會(huì)出現(xiàn)流速不平衡的情況
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正壓除氣泡
試樣數(shù)量較少,填充量較小,人工施加正壓較為方便,可采用針筒連接接頭法進(jìn)行正壓排除氣泡。
□負(fù)壓排泡
試樣量較大,填料量大,人工施加正壓不便,可用真空泵連接固相萃取裝置,負(fù)壓排出氣泡。
1.2排氣泡的時(shí)間?
在 SPE操作中,一般包括平衡活化、上樣、淋洗、洗脫四步。是否每個(gè)步驟都需要一個(gè)排氣泡?但是,一般情況下,當(dāng)填料之間有空隙時(shí),需要排出氣泡,例如,當(dāng)平衡液被激1活后,需要排出氣泡,使溶液能更好地與填料接觸。
另外還有一個(gè)容易忽略的環(huán)節(jié)也是需要排出氣泡的,一般淋洗后需要進(jìn)行抽干操作,抽干后填料間也會(huì)有空氣進(jìn)入,加入洗脫液后,也是要排出氣泡的,否則大量的氣泡也會(huì)嚴(yán)重影響洗脫液的流速和洗脫效果。
在選擇固相萃取機(jī)理時(shí),應(yīng)根據(jù)目標(biāo)化合物和干擾物的性質(zhì)考慮采用哪種萃取機(jī)理,因?yàn)樵S多化合物同時(shí)具有多種功能基。例如:2-萘胺是一弱堿性化合物(pKa=4.16),它在一定 pH條件下也可呈陽離子態(tài),同時(shí)它又具有疏水性和親水性的非極性官能團(tuán)。此時(shí),應(yīng)根據(jù)樣品基質(zhì)的具體情況,選擇有利于從干擾物中分離目標(biāo)化合物的萃取機(jī)理。當(dāng)樣品基質(zhì)中同時(shí)含有大量非極性干擾雜質(zhì)時(shí),應(yīng)盡量避免采用非極性萃取機(jī)制,而應(yīng)采用以 pKa以下兩個(gè) pH單位或以 pH=2.16為限的陽離子交換機(jī)制。相反,如果樣品中同時(shí)含有大量干擾雜質(zhì)陽離子,則應(yīng)調(diào)整樣品 pH值至6.16 (比 pKa 2單位高),采用非極性萃取機(jī)制更為有利。
骨架形狀,粒徑,孔徑
硅的基質(zhì)形態(tài)一般可分為非晶態(tài)和球態(tài)。無定型C18材料具有較高的性能價(jià)格比,是初步提純的首1選。且C18具有較好的顆粒均一性、較高的柱效和分離性,但相對(duì)價(jià)格可能稍高,可作為精制的選擇。
現(xiàn)在市場上可供選擇的填料粒徑很多,中低壓備通常是為了增大上樣量,增加流速,減小壓力而選用大粒徑填料;由于可以達(dá)到較高的柱效,因此小粒徑填料更適合高1效液相或高壓制備。在選擇填料時(shí)還應(yīng)充分考慮孔徑,分子量小于5000 da時(shí)選擇孔徑(80~120 da),而對(duì)于蛋白質(zhì)大分子分子量20000 da左右、分子量大于20000 da的樣品,通常不采用C18分離模式,采用 SEC等模式進(jìn)行分離。
廣州碩譜生物科技有限公司,反相SPE柱,是目前國內(nèi)生產(chǎn)SPE小柱較好的生產(chǎn)廠家。氨丙基SPE柱批發(fā)
普通反相液相色譜柱是一種性價(jià)比極1佳的產(chǎn)品。C18反相層析柱
采用全覆蓋鍵合硅膠作填料,穩(wěn)定性好。采用獨(dú)特的單官能團(tuán)化學(xué)鍵技術(shù)可以避免C18分子層的合成。涂覆均勻,保證了高選擇性、高1效率的固定相分離。
普通反相液相色譜柱具有優(yōu)異的穩(wěn)定性, pH適用范圍較寬(1.5~11),峰形優(yōu)良。而且抗污染能力強(qiáng),柱子使用壽命長。
一般情況下,反相液相色譜柱在使用緩沖液時(shí)還需注意以下事項(xiàng):
(a)避免使用鹽酸鹽,因?yàn)樗鼤?huì)腐蝕鋼制品;
(b)緩沖液較好的是現(xiàn)在就用,通常緩沖液是好的菌1種培養(yǎng)液,隔天或放一段時(shí)間后就會(huì)出現(xiàn)許多怪現(xiàn)象;
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使用緩沖液時(shí)要及時(shí)掌握 pH值,做到胸中有數(shù);
(d)有溫度控制的洗液道和柱子加熱到30攝氏度,便于沖洗;
(e)長時(shí)間使用緩沖液應(yīng)注意觀察接頭處是否有沉淀,如有白色鹽沉淀,用10%硝1酸定期沖洗液路(拆除柱子,沖洗30 mL10%硝1酸溶液,再用5倍水沖洗)可避免液路堵塞;
(f)使用可靠的試劑來選擇緩沖液,以避免不純鹽帶來的不必要麻煩;
轉(zhuǎn)化流相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流相相同,但溶液中沒有緩沖鹽。