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低溫生物菌種的篩選分離

篩選

工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩，挑選具有某種能力的有用菌種。

分離

首先是從土壤或腐生植物中收集含菌樣品，用無菌水稀釋后，涂布于置有適宜細(xì)菌或霉菌生長的瓊脂培養(yǎng)基平皿上，并將其倒置于恒溫箱中，培養(yǎng)一定時間，平皿上長出的許多單個菌落（單一微生物的集落）經(jīng)分別分離后即為各種純種菌株，簡稱純種，移種至試管斜面培養(yǎng)基上，置4℃冰箱備用。

生物有機肥產(chǎn)品生產(chǎn)安全性分析

雖然目前生物有機肥產(chǎn)品生產(chǎn)大多采用植物根際促生菌， 但近年來很多研究發(fā)現(xiàn)，芽孢菌屬和類芽孢菌個別菌株能產(chǎn)生菌素。 即便在安全分級目錄中列為一級免做理學(xué)試驗的， 開展生物有機肥產(chǎn)品生產(chǎn)生物安全風(fēng)險評價， 從源頭上把好安全關(guān)是產(chǎn)品質(zhì)量安全的首要保障。通過調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 用于生物有機肥產(chǎn)品的部分生產(chǎn)分類地位不明確， 甚至混亂， 難以從源頭上進行安全風(fēng)險的初步識別 。 以常見生產(chǎn)枯草芽孢菌為例， 實際上是一個表型相似的群體， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎縮） 芽孢菌、莫哈韋（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索諾拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹羅芽孢菌等 10個緣種。生產(chǎn)企業(yè)送檢的枯草芽孢菌生物有機肥產(chǎn)品， 經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)很多產(chǎn)品實際為解淀粉芽孢菌， 且許多菌株具有很強的溶血作用。通過對生產(chǎn)企業(yè)調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 部分生產(chǎn)企業(yè)選擇分離于動物腸道的解淀粉芽孢菌作為產(chǎn)品生產(chǎn)用菌株， 該類生產(chǎn)發(fā)酵周期短、 活菌數(shù)量高、 生產(chǎn)成本低， 但產(chǎn)品的應(yīng)用功效不佳， 溶血風(fēng)險大 ， 建議慎用。而植物來源的解淀粉芽孢菌溶血風(fēng)險小， 產(chǎn)品應(yīng)用效果好， 推薦使用。

低溫生物菌種的特點

種類明確，作用清楚

微生物肥料起作用的微生物必須經(jīng)過嚴(yán)格的鑒定，其分類地位明確，對人、畜、植物無害，也不會破壞土壤微生態(tài)環(huán)境。例如，某些假單胞菌在生長和代謝過程中，可以產(chǎn)生促進植物生長的物質(zhì)，但也產(chǎn)生某些有害物質(zhì)，有的甚至是人、動物或植物的病原菌，這類微生物就不能作為微生物肥料。事實上，曾有使用未經(jīng)嚴(yán)格鑒定的微生物而造成危害的教訓(xùn)?！坝行?、無害”是生產(chǎn)、施用微生物肥料的原則，許多國家對此有明確的立法。

低溫生物菌種——常用菌種介紹

球形芽孢菌

球形芽孢菌是一種在自然界中廣泛分布、形成亞末端膨大孢子囊和球形芽孢的好氣芽孢菌。在已發(fā)現(xiàn)的49個鞭毛型中有9個(H1、H2、H3、H5、H6、H9、H25、H26和H48)的菌株對蚊幼蟲有一定的殺毒作用。其中大部分高毒力菌株屬型H5、H6和H25，如2362、1593、2297、Ts-1和C3-41等[6～11]。根據(jù)其殺蚊活性，這些菌株分為高毒力菌株和低毒力菌株，所有有毒菌株都具有較高的DNA同源性（>79%），屬DNA同源型IIA型。

球形芽孢菌對不同蚊幼蟲的殺毒作用主要是由其產(chǎn)生的毒蛋白實現(xiàn)的。現(xiàn)已證明在其生長發(fā)育過程中能產(chǎn)生兩類不同毒蛋白，一類是存在于所有高毒力菌株中的晶體毒蛋白；另一類是存在于低毒力菌株中部分高毒力菌株中的Mtx素蛋白。