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廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。廣州勱博--生豬屠宰場PCR熒光定量PCR最早稱TaqManPCR,后來也叫Real-TimePCR,是美國PE(PerkinElmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。
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豬肉制品加工企業(yè)、生豬產(chǎn)品經(jīng)營者采購生豬產(chǎn)品應當批批查驗其動物檢疫合格證明、肉品品質檢驗合格證明以及非洲病毒檢測結果(報告),確保購進的生豬產(chǎn)品不帶非洲病毒;當互補序列出現(xiàn)時,探針與DNA雜交,探針轉變成一個開放的結構,呈線性,報告熒光基團與淬滅熒光基團彼此在空間上產(chǎn)生足夠的分離,熒光基團脫離了淬滅基團的影響,從而產(chǎn)生可被檢測到的熒光。采購的進口生豬產(chǎn)品應附有合法的入境貨物檢驗檢疫合格證明。不得采購沒有非洲病毒檢測結果(報告)及未經(jīng)檢疫或者檢疫不合格的生豬產(chǎn)品,確保豬肉制品和經(jīng)營的生豬產(chǎn)品不含非洲病毒。
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所謂real-time Q-PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在real-time 技術的發(fā)展過程中,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關鍵的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實時地監(jiān)測反應全過程。廣州勱博--博日養(yǎng)豬場全自動核酸提取純化系統(tǒng)實時熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數(shù))指數(shù)的方式進行模板的擴增。這兩個發(fā)現(xiàn)的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發(fā)展導致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。
廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。一般用于mRNA轉錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測定、基因芯片結果驗證、藥i效分析等。
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隨著定量PCR儀設計上的不斷改進,對溫度控制的精密性越來越高,出現(xiàn)了像Rotor-Gene這樣的管間溫度均一性達±0.01℃的定量PCR儀,而該公司新近推出的Rotor-Gene6000更可達到±0.02℃的溫度分辨率。溫度上的高分辨率使得運用定量PCR儀進行高分辨率熔解曲線(HRM)分析基因型成為可能。高分辨率熔解曲線根據(jù)序列長度、GC含量和互補性分析樣品。這兩個發(fā)現(xiàn)的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發(fā)展導致real-timeQ-PCR方法在研究工作中的運用。不同的核酸序列,哪怕僅有一個堿基的差異,也會體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。
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PCR是1985年開始出現(xiàn)的一項基因檢測技術,由于PCR技術具有簡便易行、靈敏度高等優(yōu)點,該技術被廣泛應用于基礎研究,成為分子生物學必不可少的研究工具。但在許多情況下,研究者們已不再滿足于得知某一特異DNA序列的存在與否,他們更著眼于對其進行精i確的核酸定量。因而,借助PCR對基因快速、敏感、特異而準確的定量成為目前分子生物學技術研究的熱點之一。而且目前公認ASFV對外界的抵抗力強,在自然條件下可以長時間保持感i染性,可以在血液、糞便和各種組織中長期保持感i染性。實時熒光定量PCR( real-time quantitative PCR, RQ PCR)技術實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,它以其特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優(yōu)點成為分子生物學研究中的重要工具。
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非洲(African Swine fever,ASF)是由非洲病毒(African Swine fever virus,ASFV)感i染家豬和各種(非洲、歐洲等)引起一種急性、出i血性、烈性傳i染病。但在PCR反應中,由于模板、試劑、焦磷酸鹽分子的聚集等因素影響聚合酶反應,最終導致PCR反應不再以指數(shù)形式進行而進入“平臺期”,而且一些反應的終產(chǎn)物比另一些要多,因此終點PCR反應方法定量并不準確。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病,該病也是我范的一類動物疫情。其特征是發(fā)病過程短,急性和急性i感i染死i亡率高達100%,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱(達40~42℃),心跳加快,呼吸困難,部分咳嗽,眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物,皮膚發(fā)紺,淋巴i結、、胃腸粘膜明顯出血,非洲臨床癥狀與癥狀相似,只能依靠實驗室監(jiān)測確診。
廣州勱博--養(yǎng)殖場熒光定量PCR
非洲是一種傳i染性強,危害嚴重的豬感i染病毒性疾病。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。非洲病毒(ASFV)通過直接或間接接觸傳播,在豬群眾傳播速度極快。而且,該病毒在未經(jīng)烹飪的生豬相關制品中存活時間很長,這一特點使得非洲容易向未感i染區(qū)域傳播。由于非洲可以感i染,而軟蜱通過叮咬成為非洲主要傳播途徑之一,這也給非洲的凈化帶來難度。非洲的感i染致死率極高,接近100%,并且目前沒有有效的疫i苗和治i療手段。PCR技術在傳i染病診斷上具有廣泛的應用,該技術靈敏度高,特異性強,能夠在豬、豬產(chǎn)品及環(huán)境中病毒的“蹤跡”進行有效的監(jiān)控,是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部指i定的非洲首i選診斷技術。