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低溫生物菌種——制備

也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。種子制備包括孢子制備和菌絲體制備（見圖），其中(1)～(4)為孢子制備過程。保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天(或較長時間)。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子，對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基。將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無機(jī)鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴(kuò)大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃培養(yǎng)5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子。如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶（5）液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿等）,及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應(yīng)是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

低溫生物菌種——保存方法介紹

脫水存法

①沙土保存法，能產(chǎn)孢子的細(xì)菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經(jīng)稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長良好的孢子，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經(jīng)真空抽干，外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存，保存期可達(dá)5～7年。

② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑（一般用脫脂牛奶）相混合，放在安瓿管內(nèi)于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用氧化磷或干冰使水汽結(jié)凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達(dá)5～10年之久。

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。

低溫生物的設(shè)備

耐低溫的中試設(shè)備，冰下水溫適用于3.5度（保持在5度左右），COD、氮和磷的去除率依然非常高，經(jīng)連續(xù)取樣檢測，污水中的COD、總磷和氨氮的降解率分別達(dá) 67%、56%和70%.中試非常成功。經(jīng)中試驗(yàn)證：耐低溫，在水溫3.5度時，微生物活性依舊非常高，各項(xiàng)指標(biāo)去除率都達(dá)到50%以上，是中溫微生物無法比擬的。

低溫生物菌種的特點(diǎn)

種類明確，作用清楚

微生物肥料起作用的微生物必須經(jīng)過嚴(yán)格的鑒定，其分類地位明確，對人、畜、植物無害，也不會破壞土壤微生態(tài)環(huán)境。例如，某些假單胞菌在生長和代謝過程中，可以產(chǎn)生促進(jìn)植物生長的物質(zhì)，但也產(chǎn)生某些有害物質(zhì)，有的甚至是人、動物或植物的病原菌，這類微生物就不能作為微生物肥料。事實(shí)上，曾有使用未經(jīng)嚴(yán)格鑒定的微生物而造成危害的教訓(xùn)。“有效、無害”是生產(chǎn)、施用微生物肥料的原則，許多國家對此有明確的立法。