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使用血清細胞培養(yǎng)的操作技巧

1.保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

2.將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

3.一旦在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生su時，應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生su和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

4.解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

   抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力?？贵w的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以 交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按 公式計算交叉反應(yīng)率。如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。

    細胞培養(yǎng)的污染源:微生物污染：微生物污染的原因可分為2個階段：實驗準備階段和實驗操作過程。準備階段的原因包括：實驗耗材滅菌不徹底；細胞房清潔度不夠，增加微生物污染風險；超凈臺潔凈度不夠，消毒不夠徹底，紫外線沒有預先照射足夠時間，表面沒有用酒精擦拭；沒有帶無菌乳膠手套；試劑本身已經(jīng)污染，沒有檢測出來。實驗操作中的污染，往往是不夠嚴謹，粗心大意造成，如：手從無菌試劑的上方經(jīng)過；移液器操作不當，液體接觸到移液器前端；移液管吸液過猛；槍頭沒有更換，較差污染等。不同的微生物污染物對細胞的影響也有差別，微生物中支原體和病毒對細胞形態(tài)和技能的影響是長期的，緩慢的和潛在的。而霉菌和細菌增殖迅速，能在很短的時間內(nèi)抑制細胞生長或產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺滅細胞。  

胎牛血清的使用注意事項：

 1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。

C至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20。C至37。C)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

 2、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生.

 3、請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。