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什么是試劑盒?
ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)試劑盒、酶聯(lián)吸附測定試劑盒、酶聯(lián)分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)吸附測定試劑盒等。
ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到全世界科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。
Elisa試劑盒技術(shù)原理
(1). 抗原或的固相化及抗原或的酶標(biāo)記。
(2). 結(jié)合在固相載體表面a的抗原或仍保持其活性。
(3). 酶標(biāo)記的抗原或既保留其活性,又保留酶的活性。
(4). 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
(5). 此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復(fù)性好。以反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、的特異性反應(yīng)與酶對底物的有效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。
Elisa試劑盒操作步驟
1.用蓋片鑷Elisa試劑盒將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將Elisa試劑盒培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
Elisa試劑盒操作注意事項
1.Elisa試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按污染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。