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3~5分子的生物素與1分子的蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸鹽緩沖液中,并計(jì)算溶解的毫摩爾數(shù)。如果蛋白含有不恰當(dāng)?shù)木彌_液(如Tris或者甘氨酸),可以通過在PBS中透析或濃縮的方法除去。計(jì)算:蛋白質(zhì)量(mg)/蛋白分子量(MW)=蛋白質(zhì)的毫摩爾數(shù)。
2. 在打開之前,天津sigma試劑血清,平衡生物素至室溫。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超純水中,加入足夠量濃度的生物素,一般對于10 mg/ml 蛋白來說超過12倍分子數(shù),對于2 mg/ml 蛋白溶液應(yīng)超過20倍,或者該試劑也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室溫30分鐘,或冰上放置2小時(shí)。
4. 用30 ml PBS預(yù)洗純化柱,上樣,加入與欲收集量相同的緩沖液,收集0.5 ml 或1 ml 于單獨(dú)的管中。
不穩(wěn)定試劑的純凈與否、對其變質(zhì)情況的影響不容忽視。例如純凈的化實(shí)際上不受光的影響,而含有微量或有機(jī)物雜質(zhì)的化遇光易變黑。這是普遍通用的方法,sigma試劑血清購買,試劑瓶的材料和密封程度應(yīng)根據(jù)試劑性質(zhì)而定。如:強(qiáng)腐蝕的“三酸”和液,可用帶磨口玻璃的試劑瓶,或是有塑料襯墊的螺旋蓋的玻璃瓶,則應(yīng)密封貯藏在銀制或塑料制容器內(nèi),等等。
批量購買享有質(zhì)量的保障外,還有享有比零售更低的價(jià)位,sigma試劑血清代理商,真正。對于商家為了更好積累客戶相對更偏向喜歡多購買一些產(chǎn)品客戶,以薄利多銷模式贏得客戶,贏得市場。
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