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等溫核酸試劑盒

FAQ

能否對(duì)模板進(jìn)行定量?

可以。擴(kuò)增子達(dá)到可檢出水平的時(shí)間，依賴(lài)于反應(yīng)起始時(shí)的模板量。初始模板的拷貝越多，擴(kuò)增子就越快達(dá)到可檢出水平。不過(guò)，這種定量需要精心的實(shí)驗(yàn)安排，確保對(duì)照反應(yīng)是同時(shí)開(kāi)始的。舉例來(lái)說(shuō)，可以利用鎂離子的添加時(shí)間進(jìn)行控制。因?yàn)殒V離子一旦進(jìn)入體系，RPA反應(yīng)就會(huì)開(kāi)始。

此外，較慢的擴(kuò)增過(guò)程有助于更準(zhǔn)確的定量。我們可以通過(guò)調(diào)整反應(yīng)條件或引物設(shè)計(jì)來(lái)減慢RPA的反應(yīng)速度。

核酸試劑盒的原理

核酸檢測(cè)，其實(shí)就是通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的累積來(lái)確定樣本中是否有病毒核酸。現(xiàn)在核酸檢測(cè)試劑盒（多重?zé)晒釸T-PCR法），能夠?qū)崿F(xiàn)一小時(shí)快速精準(zhǔn)診斷。

根據(jù)銳科技發(fā)布的文章《如何進(jìn)行核酸檢測(cè)帶你揭秘全過(guò)程》，目前的病毒核酸檢測(cè)試劑盒，多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測(cè)原理是以病毒獨(dú)特的基因序列為檢測(cè)靶標(biāo)，通過(guò)PCR擴(kuò)增，使我們的選擇這段靶標(biāo)DNA序列指數(shù)級(jí)增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來(lái)的DNA序列，都可與我們預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來(lái)的靶基因越多，累計(jì)的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。

核酸試劑盒

RPA技術(shù)主要依賴(lài)于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過(guò)程進(jìn)行得非?？?/span>，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。RPA擴(kuò)增的基礎(chǔ)體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴(kuò)增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴(kuò)增結(jié)果可以通過(guò)凝膠電泳進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個(gè)基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實(shí)現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。舉例來(lái)說(shuō)，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和核酸外切酶III，能實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過(guò)反應(yīng)終點(diǎn)的擴(kuò)增子總量有所減少，適合獲得強(qiáng)熒光信號(hào)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析，不適合終點(diǎn)檢測(cè)(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來(lái)，可以一步實(shí)現(xiàn)RNA模板的實(shí)時(shí)擴(kuò)增。

RPA的特性

1. 快速檢測(cè)15min進(jìn)行單分子檢測(cè)試驗(yàn)

2.簡(jiǎn)易包裝穩(wěn)定凍干形式試劑

3. 無(wú)需熱循環(huán)過(guò)程擺脫任何儀器束縛

4.便攜設(shè)備要求低，貧瘠條件亦能完成檢測(cè)

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