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等溫核酸試劑盒
RPA的原理;
重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成,對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合,防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中,由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過(guò)程進(jìn)行得非??欤话憧稍谑昼娭畠?nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。
RPA技術(shù)犀利在何處
常規(guī)PCR必須經(jīng)過(guò)變性、退火、延伸三個(gè)步驟,而PCR儀本質(zhì)上就是一個(gè)控制溫度升降的設(shè)備。RPA反應(yīng)的溫度在37°C - 42°C之間,無(wú)需變性,在常溫下即可進(jìn)行。這無(wú)疑能大大加快PCR的速度。此外,由于不需要溫控設(shè)備,RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測(cè)。據(jù)介紹,RPA檢測(cè)的靈敏度很高,能夠?qū)⒑哿康暮怂幔ㄓ绕涫荄NA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平,從單個(gè)
模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理,適用于無(wú)法提取核酸的實(shí)地檢測(cè)。
RPA是什么?
自PCR技術(shù)誕生以來(lái)已經(jīng)有三十年了。從經(jīng)典PCR、實(shí)時(shí)定量PCR再到現(xiàn)在的數(shù)字PCR,這一技術(shù)在不斷蛻變卻從未淡出我們的視野。英國(guó)TwistDx Inc公司開(kāi)發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被稱為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品,能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測(cè)。該技術(shù)對(duì)硬件設(shè)備的要求很低,特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。