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液相色譜的五大系統(tǒng)
1、進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分為手動(dòng)進(jìn)樣閥和自動(dòng)進(jìn)樣器。
2、輸液系統(tǒng)輸液泵按輸出液恒定的因素分恒壓泵和恒流泵。對(duì)液相色譜分析來說,輸液泵的流量穩(wěn)定性更為重要,這是因?yàn)榱魉俚淖兓瘯?huì)引起溶質(zhì)的保留值的變化,而保留值是色譜定性的主要依據(jù)之一。因此,恒流泵的應(yīng)用更廣泛。
輸液泵按工作方式分為氣動(dòng)泵和機(jī)械泵兩大類。機(jī)械泵中又有螺旋傳動(dòng)注射泵、單活塞往復(fù)泵、雙活塞往復(fù)泵和往復(fù)式隔膜泵。
3、分離系統(tǒng)分離系統(tǒng)包括色譜柱、保護(hù)柱以及柱溫箱。
色譜柱:色譜柱是樣品分離的核心。色譜柱在使用前必須仔細(xì)閱讀說明書,了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護(hù)方法等事項(xiàng)。色譜柱使用完后,需及時(shí)對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗。沖洗完成后,應(yīng)該將色譜柱從儀器上拆下來,兩端用廠家配的堵頭密封后,保存在色譜柱盒里。
保護(hù)柱:保護(hù)柱的作用主要是防止吸附性強(qiáng)的雜質(zhì)對(duì)色譜柱污染,從而延長色譜柱的壽命。針對(duì)不同型號(hào)的色譜柱,應(yīng)選擇相對(duì)應(yīng)填料的保護(hù)柱。應(yīng)注意柱芯也是有壽命的,應(yīng)該定期進(jìn)行更換。
柱溫箱:色譜柱溫度變化,可能會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間的變化。為了避免這個(gè)問題,建議使用柱溫箱。
4、檢測系統(tǒng)液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。
5、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)該系統(tǒng)可對(duì)測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。
半制備液相色譜層析系統(tǒng)開機(jī)
1、接通電腦和儀器電源(接通電源之前可先把吸頭拿到要使用的流動(dòng)相瓶中);
2、開儀器電源開關(guān),一般先上后下,下為檢測器開關(guān);
3、檢查流動(dòng)相是否夠,儀器上記錄的溶劑量時(shí)候正確;
4、開電腦;
5、打開儀器聯(lián)機(jī)軟件進(jìn)入界面,點(diǎn)擊啟動(dòng)設(shè)置泵流速為10,此時(shí)儀器中應(yīng)該有液體流出;
6、點(diǎn)擊平衡然后點(diǎn)擊每個(gè)波長和調(diào)整沖一段時(shí)間,待壓力穩(wěn)定后可以進(jìn)樣。
液相色譜法
色譜法的創(chuàng)始人是俄國的植物學(xué)家茨維特( M.Tswett)。1906年,俄國植物學(xué)家茨維特發(fā)表了他的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:為了分離植物色素,他將含有植物色素的石油的醚提取液倒入裝有碳酸鈣粉末的玻璃管中,并用石油的醚自上而下淋洗,由于不同的色素在碳酸鈣顆粒表面的吸附力不同,隨著淋洗的進(jìn)行,不同色素向下移動(dòng)的速度不同,從而形成一圈圈不同顏色的色帶,使各色素成分得到了分離。他將這種分離方法命名為色譜法(chromatography)。